因其中大量非抗體蛋白在包被時同樣也吸附在固相表面，業已起到了類似封鎖劑的作用。并非所有的人ELISA試劑盒固相均需封鎖，封鎖不當反而會使陰性本底增高。脫脂奶粉也是一種良好的封鎖劑，其zui大的特點是價廉，可以高濃度使用（5%）。抗體和蛋白質抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。高質量的速溶食用低脂奶粉即可直接當作封鎖劑使用，但因為奶粉的成份復雜，而且封鎖后的載體不易長期保留，因此在試劑盒的制備中較少應用。封鎖的手續與包被相類似。一般說來，雙抗體夾心法，只要酶標記物是高活性的，操縱時洗滌*，不經封鎖也可得到滿足的結果。封鎖是否必要，取決于人ELISA試劑盒模式及詳細的實驗前提。封鎖(blocking)是繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或錫袋中，在低溫可保留數月。包被的zui適當濃度隨載體和包被物的性質可有很大的變化，每批材料需通過實驗與酶結合物的濃度協調選定。但在間接法測定中，封鎖一般是不可少的。
1、有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質或小分子物質我們要事先對其改造再加以包被，我把方法扼要的列出如下：①親和素生物素：先親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，這種包被方法平均、牢固，已擴大應用于各種抗原物質的定量測定。②小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯后才能固定在固相載體上。包被原的性質很重要，蛋白濃度，是否降解，人ELISA試劑盒這關系到你做出的抗體可不可以被其識別，所以保留抗原很重要，我做重組蛋白時，師兄都嚴格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。③脂類物質：可將其在有機溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風吹干，待酒精揮發后，讓脂質天然干固在固相表面。
2、應留意以下原理：因為蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用，這種物理吸附長短特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時因為試驗的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。詳細的試驗還要有堅固的理論外也要實踐，看一下*可不可以應用到自己試驗當中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
3、但*選用什么，要依據。常用封鎖劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價廉，可以高濃度使用（5%－10％）；還有一些稀有用到的各種動物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等。封鎖就是讓大量不相關的蛋白質充填這些曠地空閑，從而排斥人ELISA試劑盒后的步驟中干擾物質的再吸附。封鎖：繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。
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